化学発光免疫検査では,アクリジンエステルは,広範囲に使用されている直接発光マーカーである.ホルモン,腫瘍マーカー,免疫球リンなどの様々な項目の検出に使用される.しかし凍結乾燥粉末からタンパク質や核酸に安定的に結合できる活性マーカーまで,溶解とラベル付けプロセスは厳格な状態制御を必要とする.高活性マーカーの取得の前提条件は,これらの操作ポイントを理解し,それを掌握することです.
溶解条件と非プロトン溶媒の選択
アクリジンエステルは,通常冷凍乾燥粉末として提供され,低温と暗い条件下で保管されます.使用すると,最初のステップは溶液に準備することです.アクリジンエステルは,分子設計によって反水解と水利性グループと導入されていますがそして最終検出環境も水溶液である場合,溶解段階自体は厳密に無水でなければならない.アクリジンエステルの末端にある炭酸酸がN-ヒドロキシスクシニミドに結合して活性エステルを形成するからです水に非常に敏感である.水を含む溶媒に直接溶解した場合,活性エステルは早速水解化し,タンパク質と結合する能力を失います.
したがって,アクリジンエステルは,プロトン化されていない溶媒を使用して溶解すべきである.最も一般的に使用される選択肢はN,N-ダイメチルフォーマミド (DMF) およびダイメチル硫酸化物 (DMSO) である.DMFとDMSOは,プロトン転送反応に参加せず,活性化エステル構造を損傷することなく,アクリジンエステルを効果的に溶解することができる.DMFでは,アクリジンエステルの溶解濃度は1リットルあたり約4ミリモールに達し,DMSOでは溶解性は1ミリリットルあたり約10ミリグラムより高い.実験に必要なラベルスケールに従って適した溶媒と溶解体量を選択できます.
マーク反応とアミド結合の形成
アクリジンエステル分子に結合したNHSグループは,ラベル付け反応の鍵です.このグループは,タンパク質分子上の主要なアミノグループと核友好的置換反応を経験することができます.N-ヒドロキスサキニミドを除去する際に穏やかな条件下で安定したアミド結合を形成する反応が完了すると,アクリジンエステルはアミド結合やエステル結合などの共性結合を通じて,ラベル付き物質にしっかりと結合する.
ラベル付け反応の効率性と特異性は,反応システムのpH値,反応時間,およびアクリジンエステルとタンパク質フィードのモラー比など,いくつかの要因に依存する.通常,弱アルカリ性条件下で実施され,アミノグループの核好性攻撃を促進する必要があります.アクリジンエステルの水解または分解を防ぐため,pHが高すぎてはならない.反応が完了した後,標識された結合体は,反応していない自由アクリジンエステルから分離する必要があります.通常は塩水の脱塩コラムや透析などの方法を使います
標識の後に保管と取り扱い
標識された物質と共性結合を形成した後,アクリジンエステルの化学的安定性は自由活性エステルと比較して著しく改善されます.標識された結合体は,弱酸性バッファ溶液で安定して存在します.特に,水解抵抗性および水利性グループを含むアクリジンエステル衍生物は,中性水溶液でも安定性を維持することができる.
アクリジンエステルの核の発光構造は,アルカリ性および酸化性環境では依然として不安定であることに注意すべきである.したがって,標識付きコンジュガートは,弱い酸性バッファシステムで保管され,保管および使用中に酸素は可能な限り除外されるべきです.必要に応じて,窒素ガスを使って溶液から溶けた酸素を除去し,マーカーの保存期間を延長するために光を避ける.
様々なアクリジンエステル誘導物の選択
アクリジンエステルの種類は1種類以上あります.異なる派生物は水素性と水解耐性によって異なります.異なる種類の標的分子に適応するために使用されますNHSエステルでラベルされた製品は,タンパク質とのアミノ結合に適しています. アクリジンカルボキシル酸は,凝縮剤を通じてタンパク質と結合する必要があります.アクリラミドヒドラジドカップル アルデヒド ポリサハリド を 自由アミノグループ を 通し て 核酸 と 含める.
アクリジンエステルの溶解要件とラベル付け原則を理解することは,化学発光マーカーを成功裏に準備するための基礎です.株式会社アクリジンエステル製品,NHSエステル,アクリジンカルボキシル酸,アクリジンヒドラジドを含む様々なアクリジンエステル製品を提供することができ,さまざまなラベルニーズに適しています.最近の買い物が必要なら詳細については,Deshengの公式サイトをクリックしてください!