HEPES is een veelgebruikte zwitterionische buffer voor celcultuur, die een stabiele zuur-base-omgeving binnen het fysiologische pH-bereik kan handhaven. Hoge concentratie bereidenHEPES-buffermoederloog is een routinematige handeling in het laboratorium, maar er zijn details waar u bij elke stap op moet letten. De kwaliteit van de moederloog en de betrouwbaarheid van daaropvolgende celexperimenten houden rechtstreeks verband met de bedrijfsnormen, van wegen en oplossen tot pH-aanpassing, van constant volume tot filtratie en sterilisatie.
1. Wegen en oplossen
Om 1 liter 1M HEPES-moederloog te bereiden, moet 238,3 gram HEPES-poeder worden afgewogen. Deze dosering wordt berekend op basis van het molecuulgewicht van HEPES. Het wordt aanbevolen om bij het wegen een balans te gebruiken die voldoende nauwkeurig is, om weegfouten te voorkomen die ertoe kunnen leiden dat de eindconcentratie afwijkt van de doelwaarde.
Voeg het afgewogen HEPES-poeder toe aan ongeveer 800 milliliter gedestilleerd water. Opgemerkt moet worden dat HEPES een slechte oplosbaarheid heeft onder zure omstandigheden en mogelijk niet snel oplost wanneer het voor het eerst aan water wordt toegevoegd. Plaats de container op een magnetische roerder en roer voortdurend totdat de oplossing volledig helder en transparant wordt, zonder dat er onopgeloste deeltjes zichtbaar zijn met het blote oog. Dit proces kost enige tijd en mag niet worden overhaast. Als het oplossen langzaam gaat, kan de roertijd op passende wijze worden verlengd, maar verwarmen is niet vereist omdat HEPES volledig kan worden opgelost bij normale kamertemperatuur.
2. PH-aanpassing
HEPES-poeder zelf is zwak zuur en de pH van de oplossing na oplossing is veel lager dan het doelbereik. Voor aanpassing van de titratie is een natriumhydroxideoplossing nodig. Gewoonlijk wordt 1M natriumhydroxideoplossing langzaam toegevoegd aan de roerende HEPES-oplossing.
PH-aanpassing is de meest geduldige stap in dit voorbereidingsproces. Natriumhydroxideoplossing moet in batches worden toegevoegd, grondig geroerd na elke toevoeging, en wachten tot de pH-meterwaarde is gestabiliseerd alvorens te meten. Wanneer u de beoogde pH nadert, is het zelfs nog noodzakelijker om druppelsgewijs toe te voegen om overmaat te voorkomen. Voor celcultuurdoeleinden wordt de doel-pH doorgaans tussen 7,3 en 7,4 ingesteld. Het wordt aanbevolen om de eind-pH op ongeveer 7,35 te houden, omdat er tijdens daaropvolgende filtratie- en opslagprocessen een lichte pH-afwijking kan optreden.
Temperatuur heeft invloed op de pH-meting. De pH-waarde van HEPES-buffer verandert met de temperatuur, en als de temperatuur van de oplossing aanzienlijk hoger of lager is dan kamertemperatuur, kan de gemeten waarde afwijken van de werkelijke pH bij de beoogde bedrijfstemperatuur. Voordat de pH wordt aangepast, moet de oplossing daarom worden gekoeld of verwarmd tot kamertemperatuur.
3. Constant volume en filtratie
Breng de oplossing na aanpassing van de pH over in een maatkolf van 1 liter en verdun tot de maatstreep met gedestilleerd water. Als het vorige proces van het oplossen en aanpassen van de pH in een bekerglas werd uitgevoerd, is het noodzakelijk om de binnenwand van het bekerglas meerdere keren met een kleine hoeveelheid gedestilleerd water te spoelen om ervoor te zorgen dat alle HEPES-componenten naar de maatkolf worden overgebracht. Na het instellen van het volume kan de pH-waarde opnieuw worden bevestigd en kunnen indien nodig kleine aanpassingen worden gedaan.
De HEPES-moederloog die voor de celcultuur wordt gebruikt, moet een sterilisatiebehandeling ondergaan. Met behulp van een membraan met poriën van 0,22 micron voor filtratie en sterilisatie wordt de bereide moederloog verzameld in een steriele houder via een steriel filter in een bioveiligheidskast. Het filtratieproces moet de juiste druk of negatieve druk handhaven om membraanschade te voorkomen.
4. Gebruik en opslag
De bereide 1M HEPES-moederloog behoort tot een reserveoplossing met een hoge concentratie. In celcultuur is de werkconcentratie gewoonlijk 10 tot 25 millimol per liter, waarbij de meest gebruikte concentratie 10 millimol per liter is. Dit betekent dat het toevoegen van 1 milliliter moederloog aan elke 100 milliliter kweekmedium de werkconcentratie kan bereiken. Het wordt aanbevolen om de moederloog voor opslag in kleine porties te verdelen om herhaaldelijk invriezen en ontdooien en besmetting veroorzaakt door het openen te voorkomen. De bewaaromstandigheden zijn over het algemeen gekoeld bij 2 tot 8 graden Celsius, waarbij aandacht moet worden besteed aan het etiketteren van de bereidingsdatum en de pH-waarde.
Hubei Xindesheng Material Technology Co., Ltd. is nauw betrokken geweest op het gebied vanbiologische buffermiddelenen diagnostische reagensgrondstoffen voor vele jaren, en heeft zich altijd ingezet voor het leveren van uiterst zuivere en betrouwbare grondstoffen van hoge kwaliteit voor de in-vitrodiagnostische industrie. De producten uit de HEPES-bufferreeks die door het bedrijf worden geproduceerd, maken gebruik van nauwkeurige synthese- en zuiveringsprocessen, waarbij elke stap strikt wordt gecontroleerd, van grondstoffen tot eindproducten, waardoor wordt gegarandeerd dat de producten een extreem hoge chemische zuiverheid, uitstekende oplossingstransparantie en uitstekende batchconsistentie hebben, en volledig voldoen aan de productievereisten van in vitro diagnostische reagentia. Als u recente aankoopbehoeften heeft, klik dan op de officiële website voor meer informatie!
Uw bericht moet tussen de 20-3.000 tekens bevatten!
