Подробное объяснение метода приготовления буфера HEPES

HEPES представляет собой широко используемый цвиттер-ионный буфер для клеточных культур, который может поддерживать стабильную кислотно-щелочную среду в пределах физиологического диапазона pH. Подготовка высокой концентрацииХЕПЕС буферматочный раствор — рутинная операция в лаборатории, но на каждом этапе есть детали, на которые следует обратить внимание. Качество маточного раствора и надежность последующих экспериментов с клетками напрямую связаны с рабочими стандартами: от взвешивания и растворения до регулирования pH, от постоянного объема до фильтрации и стерилизации.

1. Взвешивание и растворение

Для приготовления 1 л маточного раствора 1М ГЕПЕС необходимо отвесить 238,3 грамма порошка ГЕПЕС. Эта дозировка рассчитывается на основе молекулярной массы HEPES. При взвешивании рекомендуется использовать весы с достаточной точностью, чтобы избежать ошибок взвешивания, которые могут привести к отклонению конечной концентрации от целевого значения.

Добавьте взвешенный порошок HEPES примерно в 800 миллилитров дистиллированной воды. Следует отметить, что HEPES плохо растворяется в кислых условиях и может не растворяться быстро при первом добавлении в воду. Поместите контейнер на магнитную мешалку и постоянно помешивайте, пока раствор не станет полностью прозрачным и прозрачным, без видимых невооруженным глазом нерастворенных частиц. Этот процесс занимает некоторое время, и его не следует торопить. Если растворение происходит медленно, время перемешивания можно соответствующим образом увеличить, но нагревание не требуется, поскольку HEPES может полностью раствориться при нормальной комнатной температуре.

2. Регулировка pH

Порошок HEPES сам по себе является слабокислым, а pH раствора после растворения значительно ниже целевого диапазона. Для корректировки титрования необходим раствор гидроксида натрия. Обычно к перемешиваемому раствору HEPES медленно добавляют 1М раствор гидроксида натрия.

Регулировка PH — самый терпеливый этап в этом процессе подготовки. Раствор гидроксида натрия следует добавлять порциями, тщательно перемешивать после каждого добавления и дожидаться стабилизации показаний pH-метра перед измерением. При приближении к целевому pH добавлять по каплям тем более необходимо, чтобы не было переизбытка. Для целей культивирования клеток целевой pH обычно устанавливается в пределах от 7,3 до 7,4. Рекомендуется контролировать конечный pH на уровне около 7,35, так как во время последующих процессов фильтрации и хранения может наблюдаться небольшой дрейф pH.

Температура влияет на измерение pH. Значение pH буфера HEPES меняется в зависимости от температуры, и если температура раствора значительно выше или ниже комнатной температуры, измеренное значение может отклоняться от фактического значения pH при целевой рабочей температуре. Поэтому перед корректировкой pH раствор следует охладить или нагреть до комнатной температуры.

3. Постоянный объем и фильтрация

После доведения pH раствор переносят в мерную колбу вместимостью 1 л и доводят до метки дистиллированной водой. Если предыдущий процесс растворения и регулирования pH проводился в стакане, необходимо несколько раз промыть внутреннюю стенку стакана небольшим количеством дистиллированной воды, чтобы обеспечить перенос всех компонентов HEPES в мерную колбу. После установки объема значение pH можно еще раз подтвердить и при необходимости внести незначительные корректировки.

Маточный раствор HEPES, используемый для культивирования клеток, должен пройти стерилизационную обработку. Используя для фильтрации и стерилизации мембрану с порами 0,22 микрона, приготовленный маточный раствор собирают в стерильную тару через стерильный фильтр в боксе биобезопасности. В процессе фильтрации необходимо поддерживать соответствующее давление или отрицательное давление, чтобы избежать повреждения мембраны.

4. Использование и хранение

Приготовленный маточный раствор 1М ХЕПЕС относится к резервным растворам высокой концентрации. В клеточной культуре рабочая концентрация обычно составляет от 10 до 25 миллимолей на литр, наиболее часто используемая концентрация — 10 миллимолей на литр. Это означает, что добавление 1 миллилитра маточного раствора на каждые 100 миллилитров питательной среды позволяет достичь рабочей концентрации. При хранении маточный раствор рекомендуется разделить на небольшие порции во избежание повторного замораживания и оттаивания, а также загрязнения при вскрытии. Условия хранения обычно составляют холодильник при температуре от 2 до 8 градусов по Цельсию, поэтому следует обратить внимание на маркировку даты приготовления и значения pH.

Компания Hubei Xindesheng Material Technology Co., Ltd. активно участвует в областибиологические буферные агентыи сырье для диагностических реагентов на протяжении многих лет и всегда стремились предоставлять высокочистое и надежное высококачественное сырье для индустрии диагностики in vitro. Продукты серии буферов HEPES, производимые компанией, используют точные процессы синтеза и очистки, строго контролируя каждый этап от сырья до готовой продукции, гарантируя, что продукты имеют чрезвычайно высокую химическую чистоту, отличную прозрачность раствора и отличную стабильность партии, полностью отвечая требованиям производства реагентов для диагностики in vitro. Если у вас есть какие-либо недавние потребности в покупке, пожалуйста, нажмите на официальный сайт, чтобы узнать более подробную информацию!