Perché la soluzione Tris diventa gialla dopo essere stata lasciata per molto tempo? Può ancora essere utilizzata

In laboratorio è comune incontrare situazioni in cui una bottiglia diTris bufferla soluzione, dopo essere stata conservata per un certo periodo di tempo, passa da una soluzione incolore e trasparente a un colore giallo chiaro o anche marrone chiaro.Molti sperimentatori potrebbero esitare se una soluzione del genere possa ancora essere utilizzataQuesto articolo analizza le ragioni della decolorazione della soluzione di Tris e l'impatto dei diversi livelli di colore sull'esperimento.

La ragione fondamentale della decolorazione della soluzione di Tris

Il ingiallimento della soluzione di Tris dopo la conservazione non è dovuto a cambiamenti nella molecola di Tris stessa.Il Tris (triidrossimetilaminometano) ha una struttura chimica relativamente stabile e non si decompone né cambia colore da solo in condizioni di conservazione convenzionali.La vera causa della decolorazione è legata alle impurità presenti nella soluzione, il Tris può contenere tracce di aldeidi o amine durante il processo di produzione.Quando queste impurità incontrano ioni metallici e ossigeno disciolto in soluzioneIoni di metallo di transizione come ferro, rame e manganese svolgono un ruolo catalizzatore.Inoltre, il contenuto di ioni metallici nell'acqua utilizzata per la preparazione può anche influenzare la velocità e il grado di cambiamento di colore.Le soluzioni preparate con acqua deionizzata o acqua distillata hanno un tasso di cambiamento di colore leggermente più rapido rispetto all'acqua ultrapuraLa luce e la temperatura sono entrambi fattori promotori, e la luce solare diretta o ambienti ad alta temperatura possono accelerare la reazione di ossidazione.

(Materia prima Tris 25 kg/fabbrica)

Può il buffer Tris che cambia colore essere ancora usato?

La risposta a questa domanda dipende dal grado di scolorimento della soluzione e dallo scenario di utilizzo.può ancora essere utilizzato in condizioni normaliPoiché la capacità di tamponamento di Tris non è influenzata, il valore del pH della soluzione rimane relativamente stabile e il contenuto di impurità colorate è molto basso.che non causeranno interferenze osservabili alla maggior parte degli esperimenti convenzionaliPer gli esperimenti di routine quali l'elettroforesi proteica, l'elettroforesi degli acidi nucleici e il Western blot, il tampone Tris con leggera decolorazione non influenzerà significativamente i risultati sperimentali..Ma se il colore della soluzione si scurisce notevolmente, apparendo giallo scuro o marrone, indica che una certa quantità di prodotti di ossidazione si è accumulata nella soluzione,e si raccomanda di non usarlo piùQueste sostanze colorate possono aumentare la colorazione dello sfondo durante l'elettroforesi, causare interferenze di assorbimento nella rilevazione spettrophotometrica,e possono influenzare lo stato cellulare in alcuni esperimenti cellulari.

Come determinare se una soluzione Tris che cambia colore è utilizzabile

Il laboratorio può fare un giudizio semplice in base al tipo effettivo di esperimento.prendere una piccola quantità di soluzione di cambiamento di colore e condurre una prova per osservare se ci sono differenze significative nella lucidità della banda e nel colore di sfondo rispetto al tampone appena preparatoPer la purificazione delle proteine o l'analisi cromatografica, si raccomanda di essere cauti in quanto le impurità colorate possono assorbirsi sulla colonna cromatografica e influenzare l'efficienza di separazione.Per supporti di coltura cellulare, non sono raccomandate soluzioni che cambiano colore in quanto i prodotti di ossidazione possono avere effetti negativi sulla crescita cellulare.Il principio generale è che più scuro è il colore e più elevati sono i requisiti sperimentaliSe la soluzione presenta sedimenti o turbidità, indica una grave contaminazione e deve essere smaltita indipendentemente dal colore.

Come evitare che la soluzione di Tris si decolori

Prevenire il decolorazione e' piu' efficace che determinare se puo' essere usato.l'uso di acqua ultrapura appena preparata può ridurre il contenuto di ioni metallici e materia organica nell'acquaDopo la preparazione, la soluzione viene sottoposta a sterilizzazione ad alta pressione a 121 gradi Celsius per 20 minuti.che aiuta a rallentare le reazioni di ossidazione durante la successiva conservazioneLa soluzione sterilizzata deve essere conservata in un contenitore sigillato, evitando la luce e le alte temperature.la soluzione può essere suddivisa in piccoli flaconi e assunta una bottiglia alla volta per ridurre la possibilità di aprire ripetutamente il coperchio e introdurre ossigeno e inquinantiLa conservazione in frigorifero può anche ridurre efficacemente il tasso di reazioni chimiche, ma la soluzione dopo la refrigerazione deve essere riscaldata e il pH ricontrollato prima dell'uso.

Precauzioni durante la preparazione e l' uso

Se la soluzione di Tris cambia colore frequentemente, ciò indica che potrebbero esserci problemi con l' ambiente di preparazione o le condizioni di conservazione.Controllare se la purezza dell'acqua utilizzata per la distribuzione soddisfa i requisitiAlcuni laboratori sono abituati a usare contenitori di vetro per preparare e conservare soluzioni di Tris.che possono precipitare tracce di metalli dopo un uso prolungatoPer i laboratori sensibili agli ioni metallici, si raccomanda di utilizzare contenitori in polipropilene o polietilene ad alta densità.una piccola quantità di agente chelante come l'EDTA può essere aggiunta al tampone Tris preparato per rallentare il tasso di ossidazione e decolorazione degli ioni metallici nella soluzione chelanteTuttavia, va notato che l'EDTA può influenzare anche alcuni sistemi sperimentali e la compatibilità deve essere confermata prima di essere aggiunta.

(Tris bianco in polvere di materia prima)

Conclusioni

L' ingiallimento della soluzione di Tris è un fenomeno comune, che è correlato alla reazione di ossidazione catalizzata dagli ioni metallici.Una soluzione con leggera decolorazione può ancora essere utilizzata normalmente nella maggior parte degli esperimenti di routine., ma si raccomanda di scartarlo quando il colore si scurisce significativamente o si verificano precipitazioni.utilizzando contenitori e condizioni di stoccaggio adeguati, la durata della soluzione di Tris può essere prolungata efficacemente.

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