¿Por qué la solución de Tris se vuelve amarilla después de haber sido dejada durante mucho tiempo?

En el laboratorio, es común encontrar situaciones en las que un frasco deEl amortiguador de TrisLa solución, después de almacenarse durante un período de tiempo, pasa de ser una solución incolora y transparente a un color amarillo claro o incluso marrón claro.Muchos experimentadores pueden dudar de si tal solución todavía puede usarseEste artículo analiza las razones de la decoloración de la solución de Tris y el impacto de los diferentes niveles de color en el experimento.

La razón fundamental de la decoloración de la solución de Tris

El amarillento de la solución de Tris después del almacenamiento no se debe a ningún cambio en la molécula de Tris en sí.El Tris (trihidroximetilaminometano) tiene una estructura química relativamente estable y no se descompone ni cambia de color por sí mismo en condiciones de almacenamiento convencionales.La verdadera razón de la decoloración está relacionada con las impurezas en la solución.Cuando estas impurezas encuentran iones metálicos y oxígeno disuelto en soluciónLos iones de metales de transición como el hierro, el cobre y el manganeso juegan un papel catalítico en ella.Además, el contenido de iones metálicos en el agua utilizada para la preparación también puede afectar la velocidad y el grado de cambio de color.Las soluciones preparadas con agua desionizada o agua destilada tienen una tasa de cambio de color ligeramente más rápida que el agua ultrapuraLa luz y la temperatura son factores promotores, y la luz solar directa o los ambientes de alta temperatura pueden acelerar la reacción de oxidación.

(Materia prima Tris 25 kg/tambor)

¿Puede el amortiguador de color cambiante Tris todavía ser utilizado

La respuesta a esta pregunta depende del grado de decoloración de la solución y del escenario de uso.todavía puede usarse en circunstancias normalesDebido a que la capacidad de amortiguación de Tris no se ve afectada, el valor del pH de la solución se mantiene relativamente estable y el contenido de impurezas coloreadas es muy bajo.que no causará interferencias observables a la mayoría de los experimentos convencionalesPara experimentos de rutina como la electroforesis de proteínas, la electroforesis de ácidos nucleicos y Western blot, el tampón Tris con una ligera decoloración no afectará significativamente los resultados experimentales..Pero si el color de la solución se oscurece notablemente, apareciendo amarillo oscuro o marrón, indica que se ha acumulado cierta cantidad de productos de oxidación en la solución.y se recomienda no usarlo másEstas sustancias coloreadas pueden aumentar la tinción del fondo durante la electroforesis, causar interferencias de absorción en la detección espectrofotométrica,y puede afectar el estado de la célula en ciertos experimentos celulares.

Cómo determinar si una solución de Tris que cambia de color es utilizable

El laboratorio puede hacer un simple juicio basado en el tipo real de experimento.tomar una pequeña cantidad de solución de cambio de color y realizar una prueba para observar si hay diferencias significativas en la claridad de la banda y el color de fondo en comparación con el búfer recién preparadoPara la purificación de proteínas o el análisis cromatográfico, se recomienda tener cuidado, ya que las impurezas de color pueden adsorberse en la columna cromatográfica y afectar la eficiencia de separación.Para medios de cultivo celularNo se recomiendan soluciones que cambien de color, ya que los productos de oxidación pueden tener efectos adversos en el crecimiento celular.El principio general es que cuanto más oscuro sea el color, mayores serán los requisitos experimentales.Si aparece sedimento o turbidez en la solución, indica una contaminación grave y debe desecharse independientemente del color.

Cómo prevenir la decoloración de la solución de Tris

Prevenir la decoloración es más efectivo que determinar si puede ser utilizado.el uso de agua ultrapura recién preparada puede reducir el contenido de iones metálicos y materia orgánica en el aguaDespués de la preparación, la solución es sometida a esterilización a alta presión a 121 grados centígrados durante 20 minutos.que ayuda a ralentizar las reacciones de oxidación durante el almacenamiento posteriorLa solución esterilizada debe almacenarse en un recipiente sellado, evitando la luz y las altas temperaturas.La solución puede dividirse en frascos pequeños y tomarse un frasco a la vez para reducir la posibilidad de abrir repetidamente la tapa e introducir oxígeno y contaminantes.El almacenamiento refrigerado también puede reducir eficazmente la velocidad de las reacciones químicas, pero la solución después de la refrigeración debe volver a calentarse y el pH debe volver a comprobarse antes de su uso.

Precauciones durante la preparación y el uso

Si la solución de Tris cambia de color con frecuencia, indica que puede haber problemas con el ambiente de preparación o las condiciones de almacenamiento.Verificar si la pureza del agua utilizada para la distribución cumple los requisitosAlgunos laboratorios están acostumbrados a utilizar recipientes de vidrio para preparar y almacenar soluciones de Tris.que pueden precipitar trazas de metales después de un uso prolongadoSe recomienda cambiar a recipientes hechos de polipropileno o polietileno de alta densidad.se puede añadir una pequeña cantidad de agente quelante como EDTA al tampón Tris preparado para retrasar la tasa de oxidación y decoloración de los iones metálicos en la solución quelanteSin embargo, debe tenerse en cuenta que el EDTA en sí mismo también puede afectar a ciertos sistemas experimentales, y la compatibilidad debe confirmarse antes de agregarlo.

(Tris blanco en polvo de materia prima)

Conclusión

El amarilleo de la solución de Tris es un fenómeno común, que está relacionado con la reacción de oxidación catalizada por iones metálicos.Una solución con una ligera decoloración todavía puede utilizarse normalmente en la mayoría de los experimentos de rutina., pero se recomienda desecharlo cuando el color se oscurezca significativamente o se produzca precipitación.utilizando contenedores y condiciones de almacenamiento adecuados, la vida útil de la solución de Tris puede extenderse de manera efectiva.

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