細胞クローリングとトランスウェル実験におけるHEPESの適用

細胞遊走実験とTranswell実験には共通の課題があります。それは、どちらも「多段階、長期間」のプロセスであり、インキュベーター外で細胞やサンプルを繰り返し処理する必要があることです。このような実験では、pHの安定性が、多くの人が予想する以上に結果に大きな影響を与えることがあります。

培養液および操作液：ボックス外での処理中に細胞を安定したpH環境に保つために、培養システムにHEPESを補給します。

洗浄液およびインキュベーション液：HEPES含有バッファー溶液で従来のPBS洗浄液を交換または補給し、洗浄、染色などのステップ中のpH変動を低減します。3.遊走実験のための3つの操作上の提案

3.1 ボックス外での単一暴露時間を短縮します。洗浄、固定、透過処理ステップの試薬を事前に準備し、その場で予備加熱し、連続的に完了させることは、単にバッファー濃度を上げるよりも効果的です。これは最も見落とされがちで、改善しやすい点です。

3.2 固定前の洗浄液のpHに注意してください。固定前の洗浄に緩衝能のない液体を使用した場合、または液体が空気中に長時間放置された場合、CO₂の逃げとともにpHが上昇します。HEPESを含むバッファー洗浄液を使用すると、このステップをより制御しやすくなります。

3.3 試薬の予備加熱。低温の試薬は追加の温度ショックをもたらし、pH変化と組み合わさると細胞に大きな乱れを引き起こします。従来の慣行は、操作温度にバランスの取れた洗剤と固定剤を事前に準備することですが、固定剤自体には特定の要件があり、特定のメソッド指示に従う必要があります。

4.Transwell実験のための4つの操作上の提案

4.1 上室と下室の液面を一定に保ちます。これはTranswell実験の基本的な要件です。液面差は追加の水圧を形成し、遊走結果に影響を与えます。また、上室と下室間のCO₂とpHのバランスにも悪影響を及ぼします。液体添加後に目視で確認することをお勧めします。4.2 長い培養期間中の緩衝能に注意してください。遊走/浸潤実験の培養時間は通常数時間から数十時間です。この期間中に複数の中間観察が必要な場合は、HEPESを補給することでpH変動を低減できます。4.3 サンプリングおよび染色ステップを一元的に処理します。遊走と同様に、小チャンバーからの除去、消去、固定、染色などのステップは、中間駐車を減らすために一元的かつ連続的に完了させます。5.2つの一般的な考慮事項操作温度でのpH校正。HEPESのpKa温度係数は約-0.014/℃です。実際の操作温度に近い条件下でpHメーターを校正することをお勧めします。

hepesドラム包装

遊走実験およびTranswell実験に関わる変数はすでに多数ありますが、pHは最も見落とされがちで、最も改善しやすいものです。コアアプローチは2つだけです。ボックス外でも細胞に緩衝能を持たせること、そしてボックス外のステップを可能な限り短くすることです。これらの2つの対策を効果的に実施することで、通常、結果の一貫性に目に見える改善が見られます。

湖北新德盛材料科技有限公司は、長年にわたり生物緩衝剤および関連ファインケミカルの研究開発と生産に専念してきました。HEPESなどの製品は、グラムからトンレベルまでの供給とカスタマイズされた指標を提供できます。同社の本社は、湖北省鄂州市葛店開発区光谷連科城にあります。葛店と黄岡に2つの研究開発および生産拠点（70エーカー）を持ち、全カテゴリーで年間5000トンの生産能力を持っています。その製品は、IVD体外診断、生物医学、および日用化学産業で使用されています。